Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Иммуногистохимия эндометрия подразумевает изучение слизистых детородного органа. Этот метод позволяет точно оценить их состояние и выявить существующие проблемы. Благодаря полученным результатам анализа удается установить причину бесплодия и своевременно начать терапию.

Что такое иммуногистохимия

Иммуногистохимическое исследование эндометрия – это особая и сложная в выполнении процедура, позволяющая обширно изучить слизистые матки и поставить точный диагноз.

Метод подразумевает сразу два обследования – иммунологическое и гистологическое. При этом изучается структуру эндометрия, а также в нем выявляются антитела и возбудители.

Благодаря полученным результатам точно устанавливается факт наличия клеток, препятствующих зачатию, и их количество.

Иммуногистохимический анализ позволяет оценить уровень чувствительности рецепторов слоя детородного органа к естественной стимуляции гормонов в момент наступления овуляции и в процессе проведения лечения с использованием гормональных препаратов перед ЭКО.

Выполняется такое исследование в том случае, когда женщина здорова, фон гормонов и состояние эндометрия в норме, антиспермальные антитела не найдены, но беременность вопреки всему остается невозможной.

Обусловлена эта проблема тем, что маточный слой не воспринимает гормональное воздействие, перестает обновляться и утолщаться.

Что выявляет

Главная цель проведения ИГХ – выявление причин бесплодия, но в ходе исследования нередко обнаруживают различные изменения в эндометрии. По этой причине анализ назначается в случае подозрения на хронический эндометрит, не сопровождающийся характерной симптоматикой.

При получении результатов удается выявить такие нарушения, как:

• неполная трансформация маточного слоя;
• развитие эндометрита;
• нарушение фаз развития эндометрия;
• гиперплазия.

Если в полости детородного органа есть полипы и другие новообразования, то определяется, не началась ли их трансформация в онкологию.

Процедура подразумевает выскабливание полости матки. После этого полученный биоматериал тщательнейшим образом исследуется. Кроме того, удается высчитать промежуток времени, когда отмечается точное соответствие маточного слоя и эмбриона. В норме этот период наступает с 20–24-х суток цикла.

Показания

Среди показаний к выполнению этой процедуры выделяют следующие:

• определение, насколько чувствительны рецепторы эндометрия к гормональной стимуляции;
• попытки ЭКО не увенчались удачей;
• постановка диагноза «бесплодие» и выявление возможных его причин;
• подозрение на мутацию клеток в злокачественные;
• частые самопроизвольные аборты на ранних сроках;
• подозрение на наличие хронического эндометрита.

Тактика терапии подбирается после получения результатов исследования.

Противопоказания

Противопоказаний к проведению процедуры как таковых не существует. Поэтому его назначают всем женщинам, у которых беременность по каким-либо причинам не наступает. Таким образом удается определить чувствительность рецепторов маточного слоя к гормонам в период овуляции и возможность имплантации плодного яйца.

Иногда преградой к выполнению процедуры оказывается невозможность взятия тканей, которые необходимы для исследования. При этом часто назначается хирургическая гистероскопия.

Этапы диагностики

Диагностика ИГХ подразумевает выполнение биопсии матки (выскабливание слизистых детородного органа), поэтому проводят ее в тот период, когда эндометрий готов к таким манипуляциям. Врач назначает определенную дату для сдачи анализов. Крайне важно, чтобы процедура была выполнена именно в этот день.

Как правило, ИГХ назначают на 5–7-й день цикла при необходимости выявления воспалений, миомы, полипов и патологического разрастания эндометрия. При оценке рецепторной функции проведение исследования рекомендуется на 20–24-е сутки.

В процессе подготовки к процедуре нужно придерживаться следующих рекомендаций:

• в течение семи дней до исследования не принимать гормональные медикаментозные средства;
• во избежание кровотечения не прибегать к использованию препаратов, способствующих разжижжению крови;
• в день проведения иммуногистохимического исследования эндометрия строго соблюдать все правила интимной гигиены.

Диагностика проводится в несколько этапов:

1. Прежде всего вводят обезболивающее.
2. Производят установку специальных расширителей.
3. Обрабатывают ткани антисептическим средством.
4. Вводят специальный прибор – гистероскоп.
5. Выполняют выскабливание слизистых.
6. Извлекают аппарат.
7. Поврежденные сосуды сразу прижигают.
8. Полностью извлекают оборудование.
9. Повторно сканируют все исследуемые органы.
10. Убирают расширители.

Когда все диагностические мероприятия выполнены, женщину отправляют в палату, где ей нужно оставаться до тех пор, пока действие анестезии не закончится. Сразу после этого можно будет покинуть медицинское учреждение. Результаты будут готовы спустя несколько суток.

Какие результаты показывает ИГХ

Результаты исследования дают возможность врачу определить, в какой период наблюдается имплантационное окно. Это временной промежуток, в который отмечается максимальное соответствие плодного яйца и маточного слоя. При этом удается выявить наличие или отсутствие пиноподий (возвышенностей на поверхности эндометрия).

Период, благоприятный для закрепления плодного яйца в полости матки, высчитывают по циклу менструаций. Как правило, имплантационное окно наблюдается в период с 20-х по 24-е сутки, когда степень развития маточного слоя и эмбриона находится в максимальном функциональном соответствии.

В процессе изучения морфологии слоя детородного органа полученные показатели дают возможность диагностировать следующие нарушения в репродуктивной системе:

• воспалительные процессы (диффузные и очаговые инфильтраты лимфоидных клеток, плазматические клетки в строме);
• склеротические изменения в артериальных стенках;
• полипы в полости детородного органа;
• гиперплазию, эндометрит, протекающий в скрытой, хронической форме;
• пиноподии (отсутствие их или наличие);
• строение и форму рецепторов, степень их чувствительности к эстрогену и прогестерону.

В процессе подготовки к экстракорпоральному оплодотворению ИГХ дает возможность точно определить чувствительность эндометрия к воздействию гормонов. Этот момент крайне важен для удачной реализации программы репродукции.

Данные, полученные в результате исследования, помогают выявить сдвиги имплантационного окна и определить состояние маточного слоя на определенных этапах цикла. Кроме того, появляется точная информация о воспалительных процессах, протекающих в матке. Они нередко становятся причиной бесплодия.

Иммуногистохимическое исследование является хоть и сложным, но точным методом определения состояния эндометрия. С помощью этой процедуры удается определить, какие факторы препятствуют удачному оплодотворению, и диагностировать ряд патологий.

ИГХ дает максимально развернутое представление о состоянии репродуктивной системы, показывает уровень чувствительности маточных рецепторов к гормональному воздействию. Это является крайне важным при проведении экстракорпорального оплодотворения и в борьбе с бесплодием.

Зачастую после проведения диагностики и правильно подобранной тактики лечения проблемы с зачатием удается устранить.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Хронический эндометрит — часто встречающийся диагноз у женщин детородного возраста. Заболевание становится помехой для наступления беременности или проведения оплодотворения экстракорпоральными техниками. Чтобы выявить патологию и увеличить шансы на вынашиваемую беременность, проводится иммуногистохимия эндометрия.

Что это такое?

Впервые основы диагностики были использованы Альбертом Кунсом в 1941 году, когда исследовались меченые клетки. Позднее исследование было перенесено в гинекологию и стало применяться по отношению к внутреннему выстилающему слою матки. Иммуногистохимия эндометрия (ИГХ) — методика выявления клеточных или тканевых компонентов за счет связывания с мечеными антителами.

У женщин в здором маточном слое в зависимости от времени цикла меняется состав лейкоцитов, уровень содержания половых гормонов, факторы роста железистых клеток и эндометриальных. Самым значительным колебаниям подвержены ядра эпителиальных клеток.

Под влиянием эстрогена и прогестерона эпителий становится максимально чувствительными и проявляется это в средней и поздней фазе роста.

При этом под влиянием эстрогена клеточные элементы размножаются быстрее, чем под воздействием прогестерона, опережая на одну фазу цикла.

Хронический эндометрит выражается тем, что более, чем в два раза увеличивается восприимчивость клеток к гормонам по сравнению с нормальными показателями здорового маточного слоя. Для определения нормы и патологии есть специальные показатели соотношения эстрогена и прогестерона.

Что выявляет и когда назначается?

Иммуногистохимический анализ позволяет выявить дисфункциональные нарушения в тканях, которые происходят при хроническом воспалительном процессе. Если у женщины бесплодие, то характеристики при иммуногистохимии эндометрия существенно изменены. Восприимчивость к эстрогену и прогестерону позволяет говорить и способности эндометрия принять плодное яйцо и обеспечить его развитие.

При первичном и вторичном бесплодии снижается количество элементов, восприимчивых к прогестерону, и повышается объем, попавших под влияние эстрогена. В результате этого формируется “тонкий эндометрий” — ключевой маркер для ультразвукового скрининга.

Он являлся определяющим в диагностике, но теперь уступил место новому методу.

С помощью ИГХ достоверно определяют состояние выстилающего слоя матки, особенно важны эти данные при экстракорпоральном оплодотворении, чтобы оценить необходимость гормональной поддержки процесса внедрения яйцеклетки.

По результатам иммуногистохимии эндометрия, которые получает гинеколог от врача патоморфолога, можно установить, какой объем клеток маточного слоя препятствует зачатию и нормальному течению беременности.

Это актуально для женщин, которые не могут зачать плод или выносить ребенка. На основе данных скрининга становится понятна чувствительность клеток маточного слоя к стимуляции естественных процессов гормонами.

Даже на фоне относительного здоровья он бывает латентен к стероидам, поэтому созревание его клеток происходит неправильно. Следствием таких состояний являются гиперпластические изменения, эндометрит, асинхронная дифференциация клеток, неполноценная трансформация под влиянием секретов и т.д. Эти заболевания в 60% являются причиной ненаступления беременности.

Результаты иммуногистохимии будут показывать следующие патологические изменения:

• воспалительные процессы, протекающие в выстилающем маточном слое, что непосредственно нарушает его функционирование;
• иммунное бесплодие — результат выработки специфических антител, которые препятствуют зачатию, а зародыш расценивают как инородное тело и отторгают его;
• отсутствие реакции эндометрия на гормоны, что приводит к неправильному созреванию слоя, задержке определенных фаз развития, неспособности полноценно имплантировать эмбрион;
• разрастание слизистой, которая не уменьшается в размерах к концу цикла, возрастает риск появления опухолей.

Показаниями к иммуногистохимии эндометрия являются:

• безрезультатные попытки проведения экстракорпорального оплодотворения;
• невынашивание плода, срывы;
• эндометрит;
• невыясненное бесплодие.

Данные иммуногистохимии — ценнейший материал для гинеколога. С их помощью ставят правильный диагноз и назначают эффективное лечение.

Противопоказания

Специальных противопоказаний к иммуногистохимическому анализу эндометрия нет. Забор биоптата для скрининга проводится по общим правилам, поэтому противопоказаниями считают:

• беременность;
• инфекционные патологии органов малого таза;
• воспаление шейки матки.

Правильная подготовка

Для получения корректных данных необходимо правильно подготовиться к иммуногистохимии эндометрия. Проводится забор биоматериала в определенный день. Врач, ведущий пациентку, назначит наиболее благоприятную дату, она зависит от цикла. Обычно это происходит на:

• 5–7 день, если цель диагностики подтвердить эндометрит или гиперплазию;
• 20–24 день, если необходимо определить восприимчивость к гормонам.

Зная день забора биоматериала, женщина должна соблюдать определенные условия:

• за семь дней прекратить принимать гормональные лекарственные препараты (отдельные медикаменты оговариваются с доктором);
• за неделю не пить препараты, влияющие на вязкость крови;
• в день забора особенно тщательно следить за гигиеной.

Иммуногистохимия эндометрия проводится при помощи гистероскопии, неприятных ощущений у женщины не возникает. Обычно после забора биоматериала требуется некоторое время побыть в лаборатории, чтобы исключить кровотечение.

Ход процедуры

Биоматериал к ИГХ берется посредством соскоба из полости матки или пайпель-биопсии. Время забора (день цикла) зависит от цели проведения скрининга, конкретную дату определит гинеколог.

Когда биоптат получен, он помещается в емкость со специальным раствором на срок от 24 до 48 часов для фиксации. После этого из биоптата выводят кальций, воду и пропитывают парафином. При помощи микроножа на парафиновых блоках делаются срезы.

Их крепят на предметное стекло и окрашивают растворами антител с метками, чувствительными к определенным маркерам.

При наличии в эндометрии чувствительных элементов антитела с ними связываются и происходит  эффект флуоресценции. Это позволяет говорить о положительном результате. Количество применяемых растворов зависит от числа исследуемых маркеров. В основе расшифровки результатов анализа лежит степень флуореценции и процент клеток, где она произошла.

Обычно иммуногистохимия эндометрия делается быстро, его результат готов в течение недели после забора. Это оговаривается в лаборатории. Получить анализ можно в лаборатории или на электронную почту.

Расшифровка

Результат иммуногистохимического исследования эндометрия показывает восприимчивость к эстрогену и прогестерона по гистохимической шкале. Она учитывает интенсивность цвета и процентное соотношение элементов, склонных к окрашиванию. Максимум по шкале 300 баллов.

Таблица 1 — Оценка восприимчивости клеток

Показатель, балл	Интерпретация
0–10	полное отсутствие
11–100	слабая восприимчивость
101–200	умеренный уровень
201–300	выраженная восприимчивость

Процент окрашенных элементов рассчитывается по другой шкале.

Таблица 2 — Восприимчивость LIF (leukemia inhibitory factor)

Значение, балл	Интерпретация, %
	отсутствие клеток, восприимчивых к окрасу
0,5	< 5
2	< 20
4	20–40
6	> 40

Для оценки выраженности хронического воспалительного процесса в эндометрии ориентируются на окрашенные элементы CD138 и CD56.

Таблица 3 — Степень выраженности воспалительного процесса

Степень воспаления	CD138, шт.	CD56, шт.
Норма		до 10
Слабое	1	20
Умеренное	2–3	30
Выраженное	более 5	40–50

Результат исследования оценивает врач патоморфолог. После получения данных в результате указываются количественные показатели, уточняет диагноз гинеколог.

Сколько стоит

Стоимость анализа в клиниках отличается. Средняя цена 13–15 тыс. рублей. На цену влияет способ сдачи анализа — в лаборатории или на дому, дополнительное проведение гистологического исследования клеток эндометрия и другие факторы. Точную стоимость можно узнать, связавшись с представителями лабораторий.

Отзывы

По отзывам врачей и пациентов иммуногистохимический анализ имеет высокую ценность. Это исследование ставит окончательную точку в диагностике сложнейших патологий репродуктивной системы женщин. Многие пациентки, которые в течение многих лет не могут зачать малыша, после прохождения скрининга и получения эффективного лечения успешно становятся матерями.

Выводы

Для врача иммуногистохимия соединяет в себе новейшие методики иммунологии и гистологии, которые вместе дают уникальный результат.

Патологии, дифференциальная диагностика которых была ранее затруднена, теперь с легкостью определяются. Врачи отмечают, что иммуногистохимия может применяться в комплексе с другими методиками.

Это дает более развернутую картину по состоянию пациентки, поэтому при необходимости назначается именно такой скрининг.

Иммуногистохимический анализ выстилающего маточного слоя является современным методом диагностики. Применяется для женщин с патологиями эндометрия и определяет количество элементов, чувствительных к половым гормонам. Анализ проводится без затруднений. Его методика позволяет в короткие сроки выявить нужные показатели и назначить незамедлительное лечение.

Расшифровка иммуногистохимического исследования образцов эндометрия, взятых с помощью пайпель биопсии | Университетская клиника

Эти анализы работают по принципу антиген-антитело. С помощью специальных антител выявляют белковые соединения в эндометрии. Но в данном случае это не возбудители болезней, а вещества, необходимые для роста и развития эмбриона или, наоборот, возникающие во время воспаления.

С помощью такой методики можно выявлять количество гормональных рецепторов – нервных окончаний, реагирующих на уровень гормонов.

Пример результатов иммуногистохимии

Расшифровка иммуногистохимического исследования

Для проведения анализа образцы тканей, взятых во время пайпель-биопсии, помещают в фиксирующий раствор на 24-48 часа. Затем обрабатывают и пропитывают парафином, получая парафиновые блоки. Потом блок с помощью микроножа делят на срезы. На полученные тонкие фрагменты наносят раствор антител со специальными светящимися мечеными клетками.

При наличии в эндометрии определённых компонентов, антитела вступают с ними в реакцию. В результате образуются комплексы, которые можно выявить по свечению. Такая реакция, называемая реакцией флуоресценции, показывает наличие искомых веществ.

Результаты иммуногистохимического исследования зависят от количества обнаруженных светящихся соединений – комплексов, интенсивности их окраски и свечения.

Иммуногистохимическое исследование антигенов

Таким образом обнаруживают рецепторы – нервные окончания, чувствительные к определённому гормону. Чаще всего анализируют концентрацию двух видов рецепторов:

• ER – рецепторы эстрогена – гормона, выделяемого яичниками.
• PR- рецепторы прогестерона, выделяемого особым веществом – жёлтым телом. Это временный орган, образующийся на месте лопнувший яйцеклетки, которая выпустила фолликул для оплодотворения.

Для оценки результатов исследования концентрации (экспрессии) ER и PR применяется метод оценки, называемый Histochemical Score. Он основан на подсчете количества светящихся комплексов – соединений антигенов и антител.

Обнаруженные клетки делят по степени окрашивания:

• 0 -окрашивание отсутствует;
• 1- слабое;
• 2- умеренное;
• 3- сильное.

Затем определяют процентное соотношение клеток, имеющих каждый вариант интенсивности окраски. Полученный результат умножают на степени окрашивания 1, 2 или 3. Готовые подсчеты суммируют. В результате получается число в пределах от 1 до 300. Чем больше показатель, тем сильнее реакция тканей на определенный гормон.

Показатель выявляют для стромальных клеток составляющих основу эндометрия и клеточных структур желез, расположенных внутри него. В результате получаются четыре варианта экспрессии (содержания рецепторов), выражаемое в баллах.

Экспрессия	Результат в баллах
Отсуствует	0-10
Слабая	11-100
Отсутствует	101-200
Выраженная	201-300

Обычно у здоровых женщин наблюдается умеренная реакция клеток стромы и желез эндометрия. Уменьшение показателя указывает на низкую чувствительность тканей к гормонам, что может приводить к гормональным сбоям и бесплодию.

Значительное превышение среднего уровня может возникать при воспалительных и опухолевых процессах в матке. В этом случае нужно проконсультироваться у врача, который разъяснит результаты, а при необходимости назначит дополнительные исследования.

Исследуется уровень LIF – фактора – белка, влияющего на все процессы, сопровождающие наступление беременности. Он нужен на всех этапах, начиная от развития половых клеток, заканчивая имплантацией и развитием эмбриона и плода.

Экспрессию LIF рассчитывают по количеству окрашенных клеток. Результат оценивается в крестах и баллах.

Результат	Результат в баллах	Окрашенные клетки,%
–		Отсутствуют
±	0,5	Меньше 5
+	2	Меньше 20
++	4	20-40
+++	6	Более 40

В некоторых лабораториях применяются другие методы оценки этого показателя, при которых верхний показатель равен не 6, а 10 баллам. Оба варианта считаются нормой. LIF ниже в первой фазе цикла и выше во второй во время «имплантационного окна» – на 17- 24 день цикла.

При подозрении на хронический эндометрит проводится анализ на маркеры CD138 и CD56, появляющиеся при этом заболевании.

Маркер	Норма
CD56	До 10 клеток
CD138	О- норма. Единичные клетки- слабо выраженный 2-3 – умеренно выраженный, свыше 5 –выраженный

Внизу протокола исследования врач указывает гистологический диагноз, поставленный с помощью исследования клеток, и ставит свою подпись. После получения документа нужно записаться на прием к гинекологу, который проведет его расшифровку.

Продолжение статьи

Поделиться ссылкой:

Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное

[40-646] Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное

17735 руб.

Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное – комплекс исследований биоптата слизистой оболочки матки, включающий морфологическое исследование с использованием стандартных методик окраски, а также определение наличия в эндометрии некоторых необходимых для успешной имплантации эмбриона молекул и маркеров иммунокомпетентных клеток, присутствие которых свидетельствует о хроническом воспалительном процессе.

Состав исследования:

• Гистологическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное
• Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное

• Синонимы русские
• Гистологическое и иммуногистохимическое исследование рецептивности эндометрия «окна имплантации» (количество ER, PGR, СD56, CD138, LIF); гистология и ИГХ рецепторного статуса эндометрия, расширенное (фаза секреции (ER/PR/CD138/CD56/LIF)).
• Синонимы английские
• Histologic evaluation and immunohistochemical test of endometrial receptivity (advanced).
• Метод исследования
• Гистологический метод.
• Какой биоматериал можно использовать для исследования?
• Образец ткани (биоптат) из полости матки.
• Общая информация об исследовании

Эндометрий – это внутренняя часть слизистой оболочки матки, обращенная к ее полости. Его основная функция состоит в создании оптимальных условий для имплантации эмбриона в матку и успешного наступления беременности.

Ведущее значение в процессе имплантации имеет рецептивность эндометрия – способность воспринимать оплодотворенную яйцеклетку и обеспечивать ее прикрепление и внедрение в полость матки.

На рецептивность оказывают влияние изменения эндометрия на тканевом, клеточном и молекулярном уровне.

Соответственно стадиям менструального цикла, эндометрий претерпевает ряд структурных изменений, которые посредством гормональной регуляции синхронизированы с процессами созревания яйцеклетки.

Так, к началу лютеиновой фазы, наступающей после овуляции (высвобождения зрелой яйцеклетки), ткань эндометрия значительно утолщается, становится более богатой железами и обильнее кровоснабжается.

С процессами, происходящими в эндометрии, связано второе название этой фазы цикла – секреторная.

Структурная перестройка эндометрия контролируется стероидными гормонами яичников — эстрогеном и прогестероном, — влияние которых опосредуется через соответствующие рецепторы, располагающиеся внутри клеток эндометрия. Достаточный уровень рецепторов каждого гормона необходим для подготовки эндометрия к имплантации эмбриона.

Период, когда эндометрий максимально восприимчив к имплантации оплодотворенной яйцеклетки, называется имплантационным окном. Наиболее часто имплантационное окно наступает с 5-го по 10-й дни после овуляции (соответственно, 20-24-й дни 28-дневного менструального цикла), а его продолжительность составляет не более 48 часов.

При овариальной стимуляции в рамках процедур вспомогательных репродуктивных технологий данные временные интервалы сдвигаются.

В период имплантационного окна взаимодействие эндометрия и эмбриона приводит к имплантации оплодотворенной яйцеклетки и наступлению беременности, в любое другое время эндометрий является нерецептивным и успешная имплантация эмбриона в него невозможна.

Наступление окна имплантации сопровождается изменениями наружного слоя эндометрия – покровного эпителия, в котором образуются мельчайшие выпячивания (пиноподии). Их образование соответствует периоду максимальной рецептивной активности эндометрия. Именно на поверхности пиноподий происходят начальные этапы присоединения оплодотворенной яйцеклетки к эндометрию.

Для данного процесса исключительное значение имеет вырабатываемый пиноподиями цитокин – LIF (Leukemia inhibitory factor, ингибирующий лейкемию фактор), продукция которого достигает пика именно в период окна имплантации, что позволяет отнести его к молекулярным маркерам рецептивности эндометрия.

Эмбрион представляет на своих клетках рецепторы к LIF и присоединяется к участкам эндометрия с большим количеством пиноподий.

Нарушение рецептивности эндометрия в период окна имплантации, а также его взаимодействия с оплодотворенной яйцеклеткой являются причиной бесплодия, невынашивания беременности и неудач вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения, при котором, по некоторым данным, около 65% неудачных попыток связаны именно с патологией эндометрия. Значительная роль в генезе эндометриальной дисфункции, сопровождающейся нарушением рецептивности эндометрия, принадлежит хроническому эндометриту. Длительное течение воспалительного процесса в слизистой оболочке тела матки приводит к структурным нарушениям эндометрия и снижению или практически полному отсутствию на его клетках эстрогеновых и прогестероновых рецепторов.

Однако при адекватном лечении возможно восстановление физиологического состояния эндометрия и успешное наступление беременности. В связи с этим диагностика рецептивного статуса эндометрия и причин его нарушения занимает важное место в определении причин бесплодия и неудачных попыток вспомогательных репродуктивных технологий.

На первом этапе исследования биоптата в обязательном порядке проводится гистологическое исследование, которое позволяет оценить состояние клеточных структур, желез и сосудов эндометрия, а также наличие признаков воспалительных изменений.

Морфологическим субстратом хронического эндометрита являются лимфоидные инфильтраты в слое эндометрия, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток.

В последнее время в связи с широким применением противомикробной и противовоспалительной терапии классические гистологические признаки хронического эндометрита выявляются все реже, что требует проведения дополнительных методов диагностики.

В состав данного комплекса входит иммуногистохимическое исследование, которое включает в себя определение на клетках эндометрия следующих маркеров:

• ER и PR – рецепторы к эстрогену и прогестерону;
• LIF – ингибирующий лейкемию фактор;
• CD56 – маркер лимфоцитов, относящихся к классу натуральных киллеров;
• CD138 — маркер плазматических клеток.

Биологический материал для данного исследования целесообразно получать посредством пайпель-биопсии эндометрия или соскоба из полости матки. После взятия биоптата его помещают в ёмкость с фиксирующим раствором на 24-48 часов. По окончании фиксации биоптат декальцинируют, обезвоживают и пропитывают парафином – получаются готовые парафиновые блоки.

Для гистологического исследования из парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями. Затем для проведения иммуногистохимического исследования срезы окрашивают растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к одному из исследуемых маркеров.

Если в клетках эндометрия присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце.

Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежит в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики причин бесплодия и невынашивания беременности, а также неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения и других вспомогательных репродуктивных технологий.

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях дисфункции эндометрия – невынашивании беременности, бесплодии, неудачных попытках ЭКО и других вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе.

Что означают результаты?

Результат гистологического исследования включает в себя макроскопическое описание биоптата (размеры, цвет), описание желез, стромального и сосудистого компонента эндометрия с наличием или отсутствием признаков воспалительных изменений. В заключении указывается соответствие строения эндометрия фазе менструального цикла.

Результаты иммуногистохимического определения экспрессии ER и PR оцениваются по системе Histochemical Score.

В данной системе учитывается не только процент окрашенных антителами клеток, но и интенсивность окраски. Максимальное значение по этой шкале соответствует 300 баллам.

Полученное количество баллов, характеризующих экспрессию ER и PR, расценивают следующим образом:

• 0-10 баллов – отсутствие экспрессии;
• 11-100 баллов – слабая экспрессия;
• 101-200 баллов – умеренная экспрессия;
• 201-300 баллов – выраженная экспрессия.

Экспрессия LIF оценивается полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике:

• 0 баллов – (–) отсутствие окрашенных клеток;
• 0,5 балла – (±) менее 5% окрашенных клеток;
• 2 балла – (+) менее 20% окрашенных клеток;
• 4 балла – (++) от 20 до 40% окрашенных клеток;
• 6 баллов – (+++) более 40% окрашенных клеток.

Степень выраженности хронического эндометрита по маркерам иммунокомпетентных клеток CD138 и CD56 оценивают по количеству позитивных клеток в поле зрения:

• для CD138: 0 клеток – норма, единичные клетки – слабо выраженный, 2-3 – умеренно выраженный, более 5 – выраженный;
• для CD56: до 10 клеток – норма, повышены в два раза – слабо выраженный, повышены в три раза – умеренно выраженный, повышены более чем в 4-5 раз – выраженный.

Результат исследования обязательно содержит интерпретацию полученных данных врачом-патоморфологом. Клиническая интерпретация результатов исследования должна проводиться исключительно врачом соответствующей специальности.

1. Что может влиять на результат?
2. Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.
3. Важные замечания



• Объем полученного при биопсии материала должен быть не менее одного кубического сантиметра. Это важно не только для адекватного гистологического исследования, но и для возможности проведения необходимого количества иммуногистохимических реакций.
• Противопоказанием к любому виду биопсии эндометрия являются беременность и острые инфекционно-воспалительные заболевания органов мочеполовой системы.

Также рекомендуется

• Планирование беременности – здоровье партнеров (для женщин)
• Планирование беременности — здоровье партнеров (для мужчин)
• Планирование беременности — гормональные анализы
• Обследование женщин при планировании ЭКО (2-5 день цикла)
• Гормональные анализы при планировании ЭКО (20-23 день цикла)
• Обследование мужчин при планировании ЭКО
• Панель «Ответ на стимуляцию яичников при ЭКО» – 4 маркера

• Кто назначает исследование?
• Гинеколог, репродуктолог.
• Литература

1. Endometrial receptivity. Aboubakr M. Elnashar, Gamal I. Aboul-Enein. Middle East Fertility Society Journal, Vol. 9, No. 1, 2004. Pages 10-24.

2. Эндометриальная дисфункция: алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования. Г. Х. Толибова, Т. Г. Траль, М. А. Клещёв, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск  4,  том  LXIV,  2015. С. 69-77.

3. Рецептивность эндометрия: молекулярные механизмы регуляции имплантации. Ю. С. Крылова, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск  2,  том  LXII,  2013. С. 63-74.

4. Проблемы коммуникации эмбриона и эндометрия: маркеры нарушений и механизмы влияния. О. А. Мелкозерова, Н. В. Башмакова, А. В. Есарева. Российский вестник акушера-гинеколога, №5, 2016. С. 29-36.

5. Приказ Минздрава РФ от 30.08.2012 N107н «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению».

Иммуногистохимия эндометрия СD 138

Иммуногистохимическое исследование CD138 позволяет точно выявить у пациентки хронический эндометрит, а также его степень. Данное исследование является важным этапом при лечении бесплодия.

Хронический эндометрит — заболевание, при котором возникают патологические нарушения слизистой оболочки матки, её рецептивности в результате повреждения и воспаления клеток эндометрия.

Что значит «нарушение рецептивности»?
Данное заболевание напрямую влияет на восприятие эндометрием оплодотворённой яйцеклетки и возможность прикрепления к внутренним стенкам полости матки.

Поэтому эндометрит в большинстве случаев является фактором отсутствия имплантации, и в результате — женского бесплодия. Данное заболевание в 65% случаев является причиной неудач проведения программ ЭКО.

Хронический эндометрит иногда протекает бессимптомно, поэтому женщине крайне необходимо проводить своевременную диагностику.
Если воспалительный процесс слизистой матки будет происходить долгое время, то в дальнейшем могут быть серьёзные нарушения. В результате этого, количество рецепторов эндометрия может значительно уменьшиться.

• Поэтому необходимо вовремя проводить диагностику воспалений и начинать лечение эндометрита для наступления долгожданной беременности.
• Иммуногистохимическое исследование CD138 — надёжная методика для точной диагностики воспалительных процессов эндометрия, которая также даёт возможность проконтролировать эффективность гормонального лечения каждой пациентки.

Иммуногистохимические исследования стали проводить ещё около 80 лет в области онкологии. В основе методики лежало исследование биологического материала под микроскопом и выявление с помощью антител определенных молекул. И теперь данный метод вот уже 10 лет используется в России для определения патогенных возбудителей в области гинекологии и репродукции.

В чем суть иммуногистохимического исследования CD138?
Оно проводится для выявления в эндометрии маркёров плазматических воспалительных клеток CD138.

Их присутствие говорит о наличие эндометриоза (воспалительного процесса), а количество — об активности и степени воспаления.
Если диагноз подтверждается, то пациентам назначается специальная антибактериальная терапия.

Также данное исследование проводится для оценки эффективности уже проводимого лечения хронического эндометрита.

Биоматериал для исследования забирается путём соскоба или пайпель-биопсии.

Показания к иммуногистохимическому исследованию эндометрия CD138:
1. Уточнение хронического эндометрита
2. Невынашивание беременности, бесплодие или неудачные попытки ЭКО с отсутствием имплантации
3. Воспалительные процессы слизистой полости матки

1. 4. Подготовка к ЭКО
2. Противопоказания к проведению данного исследования:
   — Инфекционные и воспалительные болезни органов мочеполовой системы в стадии обострения
3. — Беременность
4. Иммуногистохимическое исследование эндометрия CD138 в Нижнем Новгороде Вы можете сделать в клинике лечения бесплодия полного цикла «Папа, мама и малыш».

Иммуногистохимическая диагностика хронического эндометрита – выявление плазматических клеток (CD138) — узнать цены на анализ и сдать в Москве

Метод определения

Гистологическое исследование эндометрия с окрашиванием гематоксилином-эозином. Иммуногистохимическое исследование экспрессии CD138 (пероксидазный и авидин-биотиновый методы).

Исследуемый материал Соскобы, аспираты, биоптаты эндометрия, фиксированные в парафиновом блоке

• Доступен выезд на дом
• Комплексное исследование эндометрия (биоптатов, аспиратов, соскобов), включающее морфологическое описание и иммуногистохимическую оценку экспрессии CD138 для дифференциальной диагностики хронического эндометрита.
• Хронический эндометрит (в соответствии с современным определением этого патологического состояния) – клинико-морфологический синдром, характеризующийся комплексом морфофункциональных изменений эндометрия воспалительного генеза, которые приводят к нарушению нормальной циклической трансформации и рецептивности ткани. 

В структуре гинекологической патологии у женщин репродуктивного возраста частота хронического эндометрита составляет от 3% до 73%. Расхождения в статистической оценке встречаемости этой патологии прежде всего связаны с трудностями морфологической верификации диагноза.

Проблема диагностики хронического эндометрита имеет социальное значение, поскольку данное заболевание часто приводит к нарушению репродуктивной функции, являясь причиной бесплодия, неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), невынашивания беременности, осложненного течения беременности и родов. 

Факторами риска развития хронического эндометрита могут являться инфекционно-воспалительные осложнения после беременностей и родов, использование внутриматочных спиралей, инфекции влагалища и шейки матки, бактериальный вагиноз, деформации полости матки с нарушением циклического отторжения эндометрия, а также инвазивные вмешательства в полость матки, лучевая терапия в области органов малого таза и пр. Хронический эндометрит может длительное время протекать, не вызывая никаких симптомов. В некоторых случаях симптомы выражены настолько слабо, что могут оставаться незамеченными. 

Наиболее важную роль в развитии нарушений репродуктивной функции при хроническом эндометрите имеют иммунологические изменения, характеризующиеся повышением числа плазматических клеток в эндометрии, выраженным клеточным и медиаторным дисбалансом на фоне хронического воспаления, подавлением фагоцитарной активности лейкоцитов. Доказано, что при хроническом эндометрите нарушается рецептивность эндометрия за счет снижения экспрессии рецепторов эстрадиола и нарушения индекса соотношения рецепторов прогестерона и эстрадиола. С этими нарушениями связаны как недостаточный рост эндометрия, так и различные формы гиперплазии эндометрия. 

Современный алгоритм обследования пациенток с клиническим диагнозом «хронический эндометрит» включает: 

• комплексное микробиологическое исследование (бактериоскопия, рН-метрия вагинального отделяемого, бактериологический посев из цервикального канала на флору и чувствительность к антибиотикам);
• ультразвуковое исследование органов малого таза с допплерометрией сосудов матки на 5-9 и 22-24 день менструального цикла; 
• определение уровня АМГФ (альфа-2-микроглобулин фертильности) в менструальной крови на 2-3 день менструального цикла;
• аспирационную биопсию с гистологическим исследованием эндометрия, осуществляемую на 7-10 день менструального цикла. 

«Золотым стандартом» гистологической диагностики хронического эндометрита является морфологическое исследование эндометрия с определением экспрессии CD138 (кластер дифференциации 138: мембранный белок, который используют в качестве иммунологического маркера плазматических клеток). Диагностическое выскабливание слизистой оболочки матки следует производить на 7-10 день менструального цикла. Общепринятыми критериями морфологической диагностики хронического эндометрита являются: 

1. Наличие лимфоидных инфильтратов, состоящих преимущественно из лимфоидных элементов, расположенных вокруг желез и кровеносных сосудов, в ряде случаев формирующих «лимфоидные фолликулы». Инфильтраты определяются во всех отделах функционального слоя эндометрия.  
2. ИГХ-верификация наличия плазматических клеток.
3. Фиброз стромы, возникающий при длительном течении хронического воспаления, иногда захватывающий обширные участки. 
4. Склероз стенок спиральных артерий эндометрия.

1. Краснопольский В. И., Серова О. Ф., Туманова В. А. и др. Влияние инфекций на репродуктивную систему женщин. Российский вестник акушера-гинеколога. 2004;5:26-29. 
2. Кузнецова А. В. Хронический эндометрит. Арх. патол. 2000;3(62):48-52. 
3. Стругацкий В. М., Силантьева Е. С. Акуш. и гин. 2002;6:51-53. 
4. Сухих Г. Т., Шуршалина А. В. Хронический эндометрит: Руководство. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010:64. 
5. Buckley C. H., Fox H. Biopsy pathology of the endometrium. Arnold. 2002:264. 
6. Eckert L. O., Hawes S. E. Endometritis: The clinical-pathologic syndrome. Am. J. Obstet. Gynecol. 2002;186(4):690-695. 
7. Eisert W. G. Dipiridamole. Platelets. Ed. by Michelson A. D. Cambridge (USA). 2002:215.
8. Glasser S. R., Aplin J. D. The endometrium. Taylor and Francis. 2002.  
9. Haggerty C. L., Ness R. B., Amortegui A. et al. Endometritis does not predict reproductive morbidity after pelvic inflammatory disease. Am. J. Obstet. Gynecol. 2003;188:141-148. 
10. Mount S., Mead P., Cooper K. Chlamydia trachomatis in the endometrium: can surgical pathologists identify plasma cell. Adv. Anat. Pathol. 2001;8(6):327-329.